圖1：PMA 是一種不具有細胞膜透性的染料，因此其僅能夠選擇性的共價修飾不具有完整細胞膜的死細菌的DNA， 而不能修飾細胞膜完整的活細菌中的DNA。由于經PMA修飾的DNA不能被擴增，因此可以通過裂解活細胞并對其中DNA進行qPCR，從而實現對活性菌的定量檢測。
如何能夠高效靈敏的檢測死細菌中存在的活細菌數量在實際應用中至關重要，包括食品安全檢查，飲用水質量控制和藥物診斷等。而傳統使用的細菌培養的檢測方法，既費時又不夠靈敏。
??? 以PCR為基礎的替代檢測方法具有快速和高靈敏度特點。然而，基于 PCR的檢測方法并不能有效的將活細胞和死細胞區分開來。近年來，Biotium公司研發的新型DNA修飾染料-疊氮碘化丙錠 (PMA?) 成功的克服了該難題。只需在進行PCR檢測前使用PMA預處理細菌樣本，就能夠選擇性的檢測活細菌，此方法敏感性高，檢測結果可靠。
??? PMA? 是一種與DNA具有高度親和性的光反應染料。該染料可以嵌入在雙鏈DNA中，當暴露在強烈的可見光下時可以與DNA形成共價連接，從而實現對DNA的化學修飾。而經修飾后的DNA將不能通過PCR進行擴增 (Figure 1)。 由于PMA? 被設計為不能被細胞膜穿透性，因此當使用該染料處理同時包含死細菌和活性菌的樣品時，只有細胞膜結構受到破壞的死細菌中的DNA能夠被化學修飾。接下來可以進一步裂解活性菌并進行qPCR檢測，從而實現對活性菌的選擇性檢測。同時，PMA?-PCR技術不僅能夠應用于細菌檢測，同樣也可以用于其他微生物的檢測（詳見PMA? 應用列表）。
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圖2(A)：大腸桿菌PMA?-qPCR擴增曲線圖。未經處理和經過熱激滅活的大腸桿菌分別使用PMA染料進行預處理，然后進行qPCR檢測。 qPCR 使用16S rRNA 引物。 |
圖2(B)：活、死大腸桿菌經PMA?處理和未經PMA?處理后的ΔCt值。(ΔCt = Ct with PMA? – Ct without PMA?). |
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圖3: PMAxx? 和PMA? 在檢測死細菌和活性菌中的區別。
??? PMAxx?作為PMA?的替代升級產品，具有更高的靈敏性。盡管PMA能夠通過qPCR有效的區分死細菌和活性菌，但并不能夠完全排除來自死細胞DNA的PCR產物，從而帶來潛在的假陽性結果。作為Biotium公司的新型染料，PMAxx?能夠更加高效的抑制死細胞中DNA的PCR擴增，從而更好的區分死細菌和活性菌。
Download the?PMA? and PMAxx? flyer?to learn more.
圖4：經溫和熱激（56℃ 3小時）滅活的大腸桿菌進行PMA?或 PMA?+Enhancer處理，用PMA-Lite光分解后提取DNA。隨后使用Fast EvaGreen? qPCR Master Mix擴增大腸桿菌DNA中377-bp片段。qPCR結果表明與PMA?單獨處理的死細胞相比，PMA?+Enhancer處理過的死細胞擴增Ct明顯延遲，而只使用Enhancer處理則對樣品PCR沒有影響。
PMA? Enhancer能夠有效地改善通過PMA?來區分革蘭氏陰性菌中死細菌和活性菌。我們提供的PMA? Enhancer為5倍濃縮液，可在使用PMA?之前添加到樣品中。當對經過Enhancer預處理過的革蘭氏陰性菌中的 進行PCR檢測時，樣品中死細胞的信號明顯減弱，而活細胞的信號則沒有變化。PMA? Enhancer也可以與PMAxx?作為搭配使用。因此，同時使用PMA? 和PMA? Enhancer可以有效的對革蘭氏陰性菌進行viability PCR檢測。 PMA? Enhancer作為一個獨立的產品提供。另外，在PMA Bacterial Viability Kits（革蘭氏陰性菌專用）中也包含該產品。
PMA?-PCR試劑盒可以用來通過使用PMA?染料和qPCR選擇性的檢測特定菌群中活細菌。試劑盒包含PMA?或PMAxx?染料，Fast EvaGreen qPCR Master Mix和經過驗證的PCR引物，可以用于檢測食品安全，公共衛生和 抗菌研究廣泛關注的特定菌株。
試劑盒包含：
? PMA?或PMAxx?染料
? Fast EvaGreen qPCR Master Mix
? ROX 校正染料
? PMA Enhancer（僅適用于革蘭氏陰性菌）
? 特定菌株經驗證的PCR引物
PMA Real-Time PCR 細菌活力檢測試劑盒適用于:
- ? 沙門氏菌
- ? 結核分歧桿菌
- ? 金黃色葡萄球菌
- ? 金黃色葡萄球菌（耐甲氧西林）
- ? 李斯特菌
- ? 大腸桿菌
- ? 大腸桿菌 O157:H7
- ? 嗜肺軍團菌
更多詳情請下載 PMA Real-Time PCR Kits.
Biotium 公司提供的PMA-Lite? LED 光分解儀， 可以用來對PMA及其他光反應染料進行控制時間和溫度的光處理。
圖5：PMA-Lite? LED Photolysis Device.產品特性:
- ? 可以同時為18個小離心管樣品提供均勻照明；
- ? 內置風扇能夠保持溫度低于37℃；
- ? 四種照明時間的選擇（10，15，20 ，30 分鐘）；
- ? 配備長壽命的LEDs 燈（465-475 nm）；
- ? 能夠有效激活PMA?，EMA 或其他類似染料。
訂貨信息：
| 編號 | 產品名稱/規格 | 價格（rmb） |
生產商 |
| 40013 | PMA 1MG |
￥1848 | Biotium Inc. |
| 31038 | PMA Enhancer for Gram Negative Bacteria, 5X Solution 16ml |
￥1036 | Biotium Inc. |
| 31050 | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - E. coli (uidA) 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 31050-X | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - E. coli (uidA) PMAxx 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 31037 | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - E. coli O157:H7 (Z3276) 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 31037-X | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - E. coli O157:H7 (Z3276) PMAxx 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 31053 | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - Legionella pneumophila (mip) 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 31051 | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - Listeria monocytogenes (hly) 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 31051-X | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - Listeria monocytogenes (hly) PMAxx 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 31034 | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - Mycobacterium tuberculosis (groEL2) 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 31033 | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - Salmonella enterica (invA) 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 31033-X | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - Salmonella enterica (invA) PMAxx 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 31036 | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - Staphylococcus aureus (mecA) 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 31035 | PMA Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - Staphylococcus aureus (nuc) 1kit |
￥4410 | Biotium Inc. |
| 40019 | PMA, 20mm in h2o 100uL |
￥1778 | Biotium Inc. |
| E90002 | PMA-Lite LED Photolysis Device 1EA |
￥27202 | Biotium Inc. |
| 40069 | PMAxx, 20mM in H2O 100uL |
￥1778 | Biotium Inc. |